Cara Ekstraksi RNA

Berikut cara ekstraksi RNA

Step 1. Persiapan alat dan bahan

bahan: kit ekstraksi, Chloroform, Etanol 70%, isopropanol, pelarut (NFW), sampel

alat: Vortex, centrifuge, mikropipet, mikrotip, mikrotube, gloves, marker, microtube rack, micropestle, cold box.



Step 2. Preparasi sampel

1. Siapkan sampel dengan bobot 30-50 mg sampel

2. Gunakan alat bedah steril

3. Setiap pergantian sampel, alat bedah dicuci dengan alkohol dan keringkan dengan tisu

4. hindari kontaminasi dari air dan darah, karena akan menyebabkan error tingkat ekspresi. Ingat ekspresi gen sangat spesifik waktu dan organ.

5. Lakukan preparasi sampel secara on ice



Step 3. Lisis sel

1. Tambahkan reagen lisis 200 uL

2. Gerus sampel hingga hancur

3. Tambahkan reagen lisis 800 uL

4. Inkubasi suhu ruang selama 5 menit



Step 4. Separation

1. Tambahkan chloroform 200 uL

2. Vortex hingga berwarna peach

3. Sentrifugasi pada kecepatan 13000 rpm, suhu 4 C, selama 15 menit

4. Ambil larutan bening dan masukkan ke mikrotube steril baru



Step 5. RNA Precipitation

1. Tambahkan 1 volume isopropanol ke dalam larutan bening (1:1)

2. Inverting pelan sebanyak 10x

3. Inkubasi suhu ruang selama 10 menit

4. Sentrifugasi pada kecepatan 13000 rpm, suhu 4 C, selama 10 menit

5. Buang larutan



Step 6. RNA wash

1. Tambahkan Etanol 70% dingin sebanyak 1 mL

2. Vortex pelan

3. Sentrifugasi pada kecepatan 13000 rpm, suhu 4 C, selama 5 menit

4. Buang larutan

5. Kering-anginkan



Step 7. RNA resuspension

1. Tambahkan pelarut (NFW, TE Buffer, ddH2O, dll) sebanyak 20-50 uL

2. Inkubasi pada suhu 55-60 C selama 15 menit atau vortex hingga pelet larut sempurna





Step 8. Storage

1. Simpan RNA hasil ekstraksi pada suhu -80 C



Videonya ada link berikut yaa... Selamat menyaksikan dan jangan lupa subscribe, like, comment, and share. Semoga bermanfaat. Terima kasih